Tinción con cristal violeta: función en la célula

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La tinción con cristal violeta es un método comúnmente utilizado en el campo de la microbiología para teñir y visualizar diferentes tipos de bacterias. Este colorante se utiliza en la técnica de tinción de Gram, que es una de las principales herramientas utilizadas para clasificar bacterias en función de sus características de tinción. A continuación, explicaremos qué tiñe el cristal violeta y cuál es su función en la célula.

Qué tiñe el cristal violeta

El cristal violeta es un colorante básico que tiene afinidad por las estructuras celulares con carga negativa, como los ácidos nucleicos y los polisacáridos. En las bacterias, el cristal violeta se une a la capa de peptidoglicano de la pared celular, que es una estructura rica en polisacáridos y ácidos teicoicos. Debido a esta afinidad, el cristal violeta tiñe las bacterias y permite su visualización al microscopio.

Qué tiñe el cristal violeta en la célula

En el contexto de la muerte celular, el cristal violeta se utiliza como una herramienta para detectar la adherencia de las células a la superficie de cultivo. Durante la muerte celular, las células pierden su capacidad de adherirse y se desprenden del fondo de la placa de cultivo. La tinción con cristal violeta permite cuantificar indirectamente la muerte celular, ya que las células muertas no se tiñen y se pierden durante el proceso de tinción.

Este método es especialmente útil para evaluar el impacto de agentes quimioterapéuticos u otros compuestos en la supervivencia y el crecimiento celular. Al teñir las células vivas con cristal violeta, se puede determinar la cantidad de tinción presente, lo que refleja la cantidad de células vivas en la muestra.

Protocolo de tinción con cristal violeta

A continuación, se presenta un protocolo básico para llevar a cabo la tinción con cristal violeta:

  • Preparar una solución de cristal violeta al 0.5% en agua.
  • Cultivar las células en una placa de cultivo durante un tiempo determinado.
  • Eliminar el medio de cultivo y lavar las células con PBS.
  • Agregar la solución de cristal violeta a cada pozo y incubar durante 20 minutos.
  • Lavar nuevamente las células con agua.
  • Medir la densidad óptica de cada pozo utilizando un lector de placas.

El resultado de la tinción con cristal violeta se expresa como la densidad óptica de cada pozo, que puede ser utilizada para determinar el porcentaje de células vivas en diferentes condiciones de estimulación.

Función del cristal violeta en la tinción de Gram

En la técnica de tinción de Gram, el cristal violeta juega un papel fundamental en la diferenciación de bacterias en Gram positivas y Gram negativas. Esta técnica se basa en las diferencias en la composición de la pared celular de las bacterias.

Las bacterias Gram positivas tienen una capa de peptidoglicano más gruesa y retienen el cristal violeta después de la tinción. Por otro lado, las bacterias Gram negativas tienen una capa de peptidoglicano más delgada y una membrana externa lipídica que impide la retención del cristal violeta. En su lugar, las bacterias Gram negativas se tiñen con un colorante de contraste, como la safranina.

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El cristal violeta es un colorante ampliamente utilizado en la microbiología para teñir y visualizar bacterias. Tanto en la tinción de células en cultivo como en la tinción de Gram, el cristal violeta desempeña un papel importante en la detección y diferenciación de diferentes tipos de células bacterianas.

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